高灵敏细胞碱性磷酸酶检测试剂盒

2020-03-19 10:05:41

ALP试剂盒
 
 产品信息 

 

 
 
 产品描述 
 
碱性磷酸酶(Phosphatase Alkline, ALP/AP/AKP/ALKP/ALPase)碱性条件下能催化磷酸单酯水解,常见底物有对硝基苯酚磷酸、磷酸苯酯等。碱性磷酸酶的活性变化与一系列生理和病理变化紧密相关,比如骨骼发育、骨骼相关疾病等。其中,ALP作为成骨细胞的副产物,血清中ALP升高和骨发育密切相关。同时,其经常作为成骨分化的早期指标进行检测。
 
本试剂盒能对细胞裂解液样品中的内源性碱性磷酸酶活性进行测定。原理在于:对硝基苯酚磷酸盐是一种常见的碱性磷酸酶显色底物,碱性条件下能被ALP催化成对硝基酚,呈黄色产物,可在405nm检测到吸光度。产物黄色越深,代表ALP活性越高,反之则酶活性越低。通过比色分析可定量检测ALP水平。
 
本试剂盒可检测96个样本,包括标准品和空白对照。建议48孔板,>20000个/孔细胞进行检测。
 

 产品优势 
 
1 试剂盒组分齐全,无需另外准备细胞裂解液,且裂解步骤简便易操作。
2 标准品浓度梯度已提供,无需二次配制。
3 计算公式简便,结果精确。

 
 产品组成 
 

 
 操作步骤 
 
1.样品准备
 
(1)细胞裂解:样品弃去培养液后,PBS(磷酸盐缓冲液)反复冲洗3次,吸净PBS,加入细胞裂解液A(建议48孔板,200ml/孔),样本-20℃或-80℃,深度冻存过夜。
 
(2)样品的稀释:若样品中含有较高的ALP活性,可以使用本品中的裂解液(去离子水)进行稀释。
 
2.试剂准备:将所有试剂取出,恢复至室温待用。
 
(1)配置显色底物溶液:显色底物C1离心,确保检测基质位于管底,取5.5ml反应液C2至离心后的显色底物C1离心管中,充分溶解混匀,冰上放置。新鲜配置的显色底物溶液需在6小时内使用。
 
(2)标准品:标准品B(1-7)用前充分混匀。标准品浓度设置见下表
 

 
3. 加样
 
参考下表使用96孔板设置标准品孔(标准品1孔即为空白对照孔)和样品孔。标准品及样品用量均为100μl/孔。如样品中的ALP活性过高,可以用裂解液或者PBS稀释后再进行测定。
 

(根据实验要求设置标准品及样品副孔数量)
 
4. 混匀:用枪头轻轻吹打或摇床混匀。
 
5. 孵育:37℃孵育60min(若待测样品中ALP活性较高,可适当缩短孵育时间)。
 
6. 终止:每孔加入100μl反应终止液D。(此时,标准孔及有ALP活性的孔会呈现不同深浅的黄色)
 
7.检测:细胞冷却5-10min至室温,405nm测定吸光度。如不能测定405nm时的吸光度,也可以在400-415范围内检测吸光度。如不能立即测定,可以在2小时内完成测定,所显示的颜色在2小时内稳定。
 
8.结果分析:根据各标准品浓度及对应吸光度绘制标准曲线。将样品孔吸光度代入所绘制的标准曲线,计算出样品中的ALP活性。稀释过的样品活性计算可乘以相应的稀释倍数。